湖北原位杂交-贝科新肽科技公司-植物组织原位杂交
武汉贝科新肽科技有限公司
- 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
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在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并定位
根据核酸探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定,如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪(computer-assisted image analysis)检测银粒的数量和分布的差异。非性核酸探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色,然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的核酸的显色强度进行检测。
预杂交
1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
杂交
1)吸去预杂交的HYB+,加上100ul已加入探针的HYB+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。